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核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle)，主要由RNA和蛋白质构成，其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类，一类（70S）存在于细菌等原核生物中，另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。
细菌核糖体提取试剂盒可用于各种原核细菌样本的核糖体的提取。

组份名称	50T	100T
组份A：核糖体提取液A	50mL	100mL
组份B：核糖体提取液B	500μL	1mL
组份C：核糖体提取液C	25mL	50mL
组份D：核糖体保存液D	10mL	20mL

2～8℃保存，有效期1年。


高压细胞破碎仪/超声细胞破碎仪，离心机，振荡器，涡旋混匀器，移液器，PBS


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
● 下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
● 细菌核糖体提取关键是待提取的细胞的质量。一般来说，最好采用Rnase活性缺失的大肠杆菌样本。
● 细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
● 细胞通常培养至接近或达到对数生长期。

• 收集对数生长期细菌细胞，离心后尽可能吸干培养基。
  
• 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 每500mg湿重菌体中加入1mL冷的试剂A和10μL冷的试剂B，充分混匀，置冰上30分钟。
  
• 用高压细胞破碎仪或超声细胞破碎仪破碎细胞。
  注：
  ● 超声条件根据不同细菌样本不一样。可采用超声3秒停10秒，超声20～30次。
  
• 在4℃,1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃,20000×g力条件下离心30分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃,170000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 在沉淀中加入400μL冷的试剂C，混匀。
  
• 在4℃,170000×g力条件下离心60分钟。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 弃上清，沉淀用核糖体保存液D重悬。
  注：
  ● 也可不用盒中的核糖体保存液重悬，根据实验需要选择合适的缓冲液重悬核糖体或直接用于下游实验。
  
• 即得到核糖体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

相关搜索：细菌核糖体提取试剂盒，Bacterial ribosome Extraction Kit